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PCR反应中的抑制剂:来源、机制与应对策略 | 人生就是博-尊龙凯时

发布时间:2025-01-16   信息来源:武才程

一、克服PCR抑制最有效的方法是将抑制剂从样本中清除。对此,针对不同类型的生物样本,需要采用合适的预处理方法,如消化、溶解和洗涤等,以去除抑制剂。

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1. 植物样本:可以采用CTAB法或SDS法等提取技术,以去除多酚、多糖等抑制成分。

2. 动物样本:建议使用蛋白酶K消化或有机溶剂提取等方法,以去除蛋白质、脂质等对PCR反应产生抑制的物质。

3. 微生物样本:可运用氯化钠或SDS等试剂,结合离心和洗涤的步骤,清除腐殖酸等潜在抑制因子。

二、一种简单有效的克服PCR抑制的方法是稀释样本,这样可以降低PCR抑制剂的浓度,从而提高反应的成功率。

三、为了减少麻烦,建议使用对PCR抑制剂具有抵抗力的改良DNA聚合酶或反应体系。例如,可以利用耐受抑制剂的酶或在反应体系中添加牛血清白蛋白(BSA)等稳定剂,从而确保后续分析的顺利进行。然而,改良酶的成本可能较高,并且针对不同的PCR抑制剂,可能需要选用不同的改良酶以及优化反应体系。

为确保实验结果的可靠性,我们在去除PCR抑制剂的过程中,还需避免引入新的PCR抑制剂。例如,在选择试剂时,应选用高质量、无抑制剂的酶制剂、dNTPs和引物等。在实验过程中,需严格遵循操作规范,确保不引入外部抑制剂,同时充分洗涤实验器材,以避免交叉污染等。

PCR抑制剂被视为影响PCR实验成功的“隐形杀手”,了解其来源、作用机制及去除方法,对开展PCR实验至关重要。通过采取一系列措施,如优化样本处理、选择高质量试剂和规范实验操作等,我们希望将抑制剂的影响降至最低,从而为实验的顺利进行保驾护航。强烈推荐关注人生就是博-尊龙凯时官方微信公众号,相遇更多精彩。