人生就是博-尊龙凯时为您提供RFL-6大鼠成纤维细胞的培养指南。本文将详细介绍细胞培养条件、处理方法及注意事项，以确保您的实验取得成功。

一、细胞培养条件

细胞名称：RFL-6大鼠成纤维细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：首次建议1:2传代；每2天更换培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，应培养至良好状态，并灌满完全培养液密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。请用75%酒精消毒整个细胞瓶，确保在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。通过显微镜观察细胞的生长情况，并以不同倍数拍照保存，前三天的照片为售后服务的重要依据。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，收集培养液至离心管中，留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2孵箱培养；若汇合度超过80%，则执行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。
3. 消化完成后，加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打细胞以确保脱落。
4. 将细胞悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬。
5. 按1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2培养箱中。

b. 细胞冻存

当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞，再添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml。待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。弃去上清后，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。冻存细胞应立即放入-80℃冰箱，必要时可转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，注意擦拭冻存管外壁以确保无菌。将细胞置于含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃上清后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放置于37℃、5% CO2培养箱内，第二天更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中较易脱落，这是正常现象。若脱落较多，可将培养液收集，进行离心处理以分离细胞。在处理过程中，务必保持无菌操作。

五、售后条款

对于细胞出现的问题，我们提供重发服务的情况包括运输途中出现问题、细胞污染等，具体标准请见附加条款。对于因客户造成的问题，则不提供重发服务。我们鼓励客户在实验中使用人生就是博-尊龙凯时的细胞培养体系，以确保最佳效果。