肠道类器官作为一种极具真实肠道结构和功能的体外模型，已成为生物医学研究中探讨肠道生理、病理以及疾病机制的重要工具。培养小鼠肠道类器官的过程中，需精确控制培养条件及细胞因子的添加，各个阶段所需的细胞因子也有所不同。

一、初始培养阶段

在该阶段，使用基础培养基（如DMEM/F-12）进行干细胞增殖。所需生长因子包括：

• Wnt-3a：激活Wnt信号通路，维持干细胞的自我更新。
• R-spondin-1：增强Wnt信号，促进干细胞增殖。
• EGF（表皮生长因子）：促进细胞增殖。

抑制因子方面，Noggin用于抑制BMP信号，确保干细胞保持未分化状态。

二、分化诱导阶段

此阶段继续使用DMEM/F-12等基础培养基，加入ActivinA和FGF2以促进定形内胚层的形成。此外，在分化中期加入IL-22以促进潘氏细胞的分化，CHIR99021（GSK3β抑制剂）则用于调控Wnt信号，有助于细胞的分化。在这一过程中，可以适当减少EGF的浓度，以避免对细胞增殖的过度刺激。

三、维持与长期培养阶段

当类器官完成分化后，进入维持与长期培养阶段，其培养基调整主要是为了保持类器官的稳定性和功能。继续使用适合的基础培养基，同时根据需求调整Wnt信号通路的活跃程度，适当调整Wnt-3a与Noggin的浓度。此外，逐渐减少或去除ActivinA、FGF2等分化诱导因子。

四、注意事项

在培养过程中，需定期更换培养基，通常每2-3天更换一次，以确保营养成分充足和代谢废物清除。定期观察类器官的形态与生长状态，方便及时调整培养条件。同时，严格遵守无菌操作规范，避免发生污染。

通过上述阶段性的培养基调整，可以有效诱导小鼠肠道类器官的成功分化，并维持长期稳定培养。值得一提的是，人生就是博-尊龙凯时不仅提供上述小鼠肠道类器官培养所需的基础培养基和细胞因子，还提供现成的小鼠肠道类器官培养基套装3DCultrIntestinalOrganoidGrowthMedium(Mouse)，使科研工作更加便捷高效，助力科研之路。